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아포염색(Endospore staining)

-목적: 아포 염색은 세균아포의 형태 및 위치 관찰을 위한 염색법이다.

-아포 소유균: 그람 양성 막대균이고 편성 호기성인 Bacillus 속이나 편성 혐기성인 clostridium 속, 그람양성 알균ddiddl인 Sporosarcia균속의 세균들이 속하며 이들이 가진 endospore의 벽은 굴절성이 있고 2~3중으로 싸고 있어서 물리 화학적 외부요인에 대해 상당한 내성을 가지며 외부로부터 저항이 강하다. 그렇기 때문에 용액이나 집기 등을 멸균할 때 주의를 요해야 하며 아포생성균 중에는 위험한 병원균이 여러 종류 있다. 이들의 아포벽은 두꺼운 지질막이나 지단백(lipoprotein)막으로 싸여 있기 때문에 일반 염료색소가 침투하기 어렵다. 아포 형성균들은 모두 그람 양성 (간)균에 속한다.

①     가온염색: 5% malachite green로 가온염색하며 모두 푸른색으로 염색된다.

②     탈색: 아포는 내성이 있기 때문에 탈색이 되지 않아 푸른색으로 염색이 되어 있으며 다른 것들은 다 탈색되어 염색이 되지 않은 상태로 보인다.

③     대조 염색: 아포는 탈색이 되지 않았기 때문에 대조 염색도 되지 않아서 푸른색으로 보이고, 다른 균체나 영양세포들은 대조염색되어 붉은 색으로 보이게 된다.

항산성염색(acid fast staining)

-결핵균이나 나균과 같은 Mycobacterium속에 속하는 균들은 유지질로 된 두꺼운 왁스성외포(소수성 mycolic acid)로 싸여 있어서 보통 염색법으로는 염색이 되지 않고 염기성 색소를 이용해 가온 염색 또는 장시간 염색하면 산이나 알코올로 처리하여도 탈색되지 않는 특징이 있다. 이를 이용해 항산성 균을 동정하는 할 수 있는 방법이 항산성 염색이다. 색소의 침투력을 강화하기 위하여 Ziehl이 5% phenol을 fuchsin에 첨가하여 쓰는 Ziehl-Neelsen(가온 필요)법이 가장 많이 이용되고 있으며, 항산성 균은 청색배경에 적색으로 염색된다.

-항산성균의 특징: mycobacteria나actinomycetes, Nocardiabrasiliensis, Staphylococcus aures등이 항산성균에 속하며, mycolicacid라는 지질을 다량 함유하고 있다. mycolic acid는 색소의 세포 침투를 저지하고 일반 세균에는 용이하게 침투하여 살균력을 발휘할 수 있는 농도의 NaOH에도 저항성을 가지게 해준다. 어느 세균의 염색성이 ‘항산성’이라 함은 색소가 각종 용매에서의 용해도와 관계되어 있음을 말한다. 예를 들면 붉은 색소인 basic fuchsin은 물이나 산성 alcohol과 물의 혼합체에서보다 지질이나 wax에서 그 용해가 더욱 용이하다. 석탄산(phenol)도 물에서보다 지질(lipids)이나 wax에서 더 잘 용해된다. 항산성 염색 과정에서 색소 basic fuchsin에 함유된 phenol은 용해가 쉬운 lipids질의 세포로 침투한다. 탈색제 acid-alcohol의 작용에도 불구하고 색소(red)는 세포 지질(cellular lipids)과 친화성이 있어 일단 염색된 상태에 남게 되어 탈색제에 저항을 보인다.

- 염색 방법

Ziehl-Neelsen법: Carbolfuchsin으로 염색 후 가온해야 하고 대조염색약으로 메틸렌 블루를 이용한다.
Kinyoun법: 가온하지 않으며 malachite green으로 대조염색한다.

-염색과정과 결과

①     carbolfuchsin 염색: 항산성균과 비항산성균 모두 붉은 색으로 염색 된다.

②     탈색: 색소는 항산성균의 세포 지질과 친화성이 있어 항산성균에서는 탈색되지 않고 비항산성균은 탈색된다. 그래서 항산성균은 붉은 색으로 보이고, 비항산성균은 염색이 되지 않은 상태로 보인다.

③     대조 염색: 항산성균은 탈색되지 않았기 때문에 대조 염색이 되지 않고 비항산성균은 탈색이 됐기 때문에 염색이 된다. 그래서 항산성균은 붉은색, 비항산성균및 배경은 푸른색으로 보인다.

-   -항산성 염색약은 잘 지워지지 옷이나 손에 닿지 않게 주의해야 한다.

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