유화수소 생산시험
1. 목적: 어떤 균들은 유황을 함유한 아미노산을 분해하여 유화수소(H2S)가스를 만들어 내는데 유화수소 생산은 철분이 포함되어 있는 배지에 균을 배양함으로써 쉽게 증명할 수 있다.
당을 발효시키는 세균(fermenter)인지발효시키지 않는 세균인지 동정할 때 이용할 수 있는 시험이다.
2. 준비물: 영양우무배지에서 18시간 배양한
Escherichia coli
Salmonella paratyphi A
Pseudomonas aeruginosa
S. typhimurium
Triple sugar iron 사면 우무배지: glucose(0.1%)+lactose(1%)+sucrose(1%)+pH indicator(phenol red)+H2S indicator(철 포함)+peptone(발효안하는세균을 위한)
3.순서
①각 균을 백금이를 이용하여 TSI 사면 우무배지의 바닥까지 찔러 접종하고 사면에도 선상 도말한다.
②37℃에서 18시간 배양한다.
③배양 후 사면과 butt를 관찰하고 gas가 생겼나 H2S가 발생하였나 여부를 해석하고 기록한다.
4. mechanism
①H2S생산 :산성 환경에서 박테리아는 Sodium thiosulfate를 만나면 황화수소를 형성하는 데 황화수소는 철이온에 의해 검은 색의 불용성 침전물을 형성한다.
②사면변화,고층변화: 탄수화물의 농도가 다르다는 것이 이 test에서 중요하다. glucose는 다른 탄수화물들에 비해 양이 적은데 빨리 사용되기 때문이다.
-만약 세균이 글루코스만 발효시킨다면 배지 안에 있는 펩톤을 aerobic하게 이용하기 때문에 사면은 alkaline이 된다. 그래서 alkaline slant& acid butt가 나온다.
-non enteric gram- 세균은 alkaline이거나 변화가 없을 것이다. 만약 사면과 고층 모두 알칼린이라면 세균이 펩톤을 혐기적으로 호기적으로 둘 다 이용한 것이다. 만약 사면은 alkaline인데 고층은 변화가 없다면 호기적으로만 펩톤을 이용한 것이다.
-만약 수크로스나 락토오스가 발효되면 사면과 고층 모두 acidic하여 yellow가 나온다.
5. 해석
①H2S생산
H2S indicator(Ferrous ammonium sulfate+ Sodium thiosulfate or Ferrous sulfate+ sodium thiosulfate)를 이용해 알 수 있다. →Black insoluble precipitate가 배지에서 관찰된다.
②사면변화,고층변화: PH indicator인 phenol red로 알 수 있다.
Yellow(A): 당을 발효시켜 산을 만듬
Red(K): 당을 발효시키지 않아 산을 만들지 못함 , 펩톤을 이용( 펩톤은 분해될 때 암모니아가 형성된다.)
③가스생성
(+):배지가 들려 올라감
(-): 변화 없음
