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  1. 2013.05.26 S.Typhimurium,E.Coli(O157:H7), S.Aureus 감별에 쓸 배지
STUDY/V.M. 본2-12013. 5. 26. 22:51

1) SS agar (Salmonella-Shigella agar)

병원성 장내세균, 특히 Salmonella 균주를 분리하는데 사용하는 선택감별배지이다. 배지 내의 bile salt brilliant green은 균 성장의 억제제로 작용하며 기질과 지시제로 유당과 neutral red가 들어 있으며, H2S 생성을 확인할 수 있는 지시제로는 sodium thiosulfate ferric citrate가 첨가되어 있다. Lactose를 발효하는 E. coli, K. pneumoniae 등은 작은 분홍색 또는 적색 집락을 형성한다. Lactose를 발효하지 않는 Salmonella, Proteus, Shigella균주 등은 무색 집락을 형성하며 H2S 생성 Salmonella 균주는 중앙이 검은 무색 집락을 보인다. Shigella의 일차적인 분리 목적으로는 권장되지 않는다.

 

2) BG agar (Brilliant green agar)

Lactose/Sucrose 발효를 통해 S.typhi로부터 Salmonella를 분리하는데 사용하는 선택배지이다. 처음에는 커피색인 배지는 배양하는 동안 붉은색으로 변하게 된다. Brilliant Green이 첨가되어 있어 그람 양성균과 Lactose/Sucrose를 발효하는 Salmonella. spp를 제외한 그람 음성균을 억제한다. Salmonella가 존재하는 경우 small, transparent, colorless or pink or opaque-white 한 집락을 형성하며 종종 pink or red zone에 둘러싸여 있게 된다. 그람 음성이면서 Lactose/Sucrose 발효하는 균의 경우 opaque green-yellow한 집락을 형성하며, yellow halo에 둘러싸여 있다. Proteus.spp와 같은 다른 Lactose 음성 균들은 pale pink or red color, transparent한 집락을 형성하며 brilliant red halo에 둘러싸여 있다.

 

3) MacConkey agar 

MacConkey Agar(MAC) bile salt가 포함되어 장 내에 서식하는 균을 동정하는 쓰이는 selective Agar이다. 또한 MAC lactose neutral red (pH indicator)를 포함하고 있기 때문에 differential media 라고도 한다. (lactose-fermenting 박테리아와 non-lactose fermenting 박테리아를 감별해 낼 수 있음)예를 들어 E.coli Klebsiella 속은 lactose ferment하기 때문에 그 colony가 빨갛거나 분홍색인 반면 Proteus, Shigella, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa 같은 경우 lactose ferment하지 못하기 때문에 colony가 흰색 내지는 크림색이다. MAC의 단점은 대장균의 일종인 Streptococcus (S. faecalis, Enterococcus를 제외한)가 자라지 못한다는 점이다.

MacConkey 한천평판배지에는 담즙산염 (bile salts)과 유당이 들어 있다. 그람양성세균은담즙산염에 의하여 억제되며 유당을 발효하는 세균은 분홍빛의 집락을 보이므로 이 배지는 그람음성간균의 선택배지이면서 유당발효세균을 확인하는 감별배지의 기능을 한다. Proteus spp.의유주현상을 억제하기 위해서는 한천의 농도를 5%정도로 높이거나 NaCl을 빼고 배지를 제조한다. Hemorrhagic Escherichia coli (혈청형 O157:H7) sorbitol 음성이므로 lactose 대신 sorbitol이 첨가된 MacConkey 배지를 사용하여 선별검사에 이용할 수 있다.

 

4) MacConkey sorbitol Agar 

MacConkey agarsobitol이 첨가되어 있는 것으로 E.coli 0157: H7 sorbitol을 이용하지 못하는 점을 이용하여 다른 strain과 분리할 수 있다.

 

5) XLD agar 

이 배지는 분변 검체에서 설사 원인균, 특히 Shigella를 분리하는데 사용하는 선택감별배지로서 배지내의 sodium desoxycholate는 장내 상재균의 일부를 억제한다. 또한 배지 내에는 xylose, sucrose, lactose가 첨가되어 있기 때문에 이들 당을 발효하지 않는 Shigella, Providencia와 일부 Proteus 균주는 적색 집락을 형성하며, 당발효균종은 배지 내의 pH를 낮춰 phenol red 지시제가 노란 색이 된다. Salmonella Edwardsiella균주는 xylose만 발효하며 lysine의 카르복실기를 분해한다. 그러므로 배지 내의 xylose-lysine 비율은 Salmonella Edwardsiella균종이 xylose를 먼저 발효하여 xylose가 고갈되면 lysine을 분해하여 적색 집락이 되도록 맞춘다.

또한 lysine decarboxylase 양성인 장내 균종에 의한 배지의 알칼리화를 막기 위해 lactose sucrose 2배 증량하여 과량의 산생성이 되도록 첨가한다. Ferric ammonium citrate 지시제는 hydrogen sulfide와 반응하므로 H2S생성 균주는 검은 색이 된다.

Escherichia spp., Enterobacter spp., Klebsiella spp., Serratia spp., Citrobacterdiversus, Providenciarettgeri, Morganellamorganii, Yersinia enterocolitica 등의 균종은 노란색 집락이며Citrobacterfrundii, Proteus vulgaris, P. mirabilis 등의 균종은 중앙이 검은 노란색 집락이고, Shigella, Providentia, H2S-negative Salmonella, Pseudomonas, 일부 P. rettgeri균종은 적색 집락이며 Salmonella Edwardsiella균주는 중앙이 검은 적색 집락이다.

제조한 XLD 배지는 적색 빛을 띠고 투명해야 한다. 배지를 너무 과열하여 침전물이 생기면 집락이 다소 작아지는 경향이 있다. 노란 색 집락은 sodium desoxycholate의 침전 때문에 불투명하게 보인다. 배지내의 반응은 24시간이 지나면 노란 색이 적색으로 전환될 수 있으므로 배양 18-24 시간 내에 판독해야 한다.

 

6) BPW broth

Salmonella 속 균의 비 선택적 배지로서 음식으로부터 Salmonella 속을 분리하는데 이용된다. peptone nitrogen, carbon, vitamin, mineral을 제공한다. 염화소듐은 삼투압을 유지하며, 인은 배지의 완충작용을 한다.

 

7) RV (Rappaport-Vassiliadis) broth 

Salmonella 균주의 증식배지로 사용되며, Soya peptone, Magnesium chloride, Potassium dihydrogen phosphate, Di potassium hydrogen phosphate, Sodium chloride, Malachite green 등을 함유하고 있으며, RV 배지에 세균을 배양하기에 앞서, BPW 배양액으로 전증식배양(pre-enrichment culture)을 거치는 것이 일반적이다.

 

8) BHI (Brain heart infusion) broth

Streptococci, Meningococci, Pneumococci, 혹은 fungi yeast 등 다양한 미생물을 무선택적으로 배양하기에 적합한 고영양 액체 배지로서, 배양액 내의 Dextrose가 탄소에너지원으로 이용되고 Sodium chloride는 삼투압의 균형이 유지 되도록 하며, 이 외에 질소 화합물, 비타민, 아미노산 과 무기염류 등이 함유 되어 있어, 여러 미생물들의 성장을 가능케 한다.

 

9) Blood agar 

용혈 효소(hemolysins)를 가지는 미생물들을 감별할 수 있는 감별배지이다베타 용혈성을 띄는 경우, 집락의 주변이 투명하게 나타나고, 알파 용혈에서는 혈구세포의 부분적인 파괴만을 일으켜 집락의 주변에 yellowish/greenish/brownish discoloration이 나타난다.

 

10) Mannitol salt agar 

Mannitol salt agar는 선택배지로써 사용되어 짧은 시간 안에 병원성 미생물을 구분하는 데에 중요하다. agar는 고농도(~7.5%-10%)NaCl을 포함하여 gram positive bacterium Staphylococci (Micrococcaceae)에 선택적이다. 왜냐하면 대부분의 세균들은 7.5%-10%NaCl에 견디지 못하기 때문이다.또한 mannitol과 지시약 phenol red를 포함하고 있어mannitolfermentors를 위한 감별배지로 쓰인다. coagulase-negative Staphylococci는 배지의 색변화 없이 작은 분홍색이나 빨간 집락을 형성하는 반면,Coagulase-positive Staphylococci는 배지에 노란색 zone과 노란색 집락을 형성한다.만약 미생물이 mannitol을 발효시킬 수 있다면, 형성된 산이 페놀레드가 노랗게 될 것이다. 이것은 presumptive pathogen (pp) Staphylococci의 동정에도 사용된다.


Gram + staphylococci :만니톨 발효: 배지가 노란색으로 변함 (. S. aureus)

Gram + staphylococci :만니톨 발효x: 배지의 색변화x (. S. epidermidis)

Gram + streptococci :성장이 억제됨

Gram - :성장이 억제됨




세균의 감별배지에서의 성장

Salmonella

E. Coli

Staphylococcus.

SS agar (Salmonella-Shigella agar)

무색투명한colony를 형성하며, H2S를 생성하는 균주는 중앙이 검은 무색집락을 보임.

작고 분홍색이나 빨강색의 집락을 형성.

그람 양성균으로 자라지 않음.

BG agar (Brilliant green agar)

S. typhiS. paratyphi을 제외한 균주에서 흰색에서 빨강색의 집락 형성.

노란색이나 녹색의 집락 형성.

그람 양성균으로 자라지 않음.

MacConkey agar

자라지만 집락이무색이거나 호박 빛깔.

성장이 잘 이루어지며 분홍빛의 집락 형성.

bile salts crystal violet 에 의해 그람 양성 구균 저해

MacConkey sorbitol Agar

lactose ferment하지 못하기 때문에 colony가 흰색 내지는 크림색이다.

O157:H7: D-sorbitol을 분해x, colorless

O157:H7외의 균: D-sorbitol을 분해, pink colony

bile salts crystal violet 에 의해 그람 양성 구균 저해 [출처]E. coli selective agar, Mac agar, EMB agar|작성자soorin1105

 

BPW broth

성장이 잘 됨.

성장이 잘 됨.

성장이 잘 됨.

XLD agar

중앙에 투명한 검은색과 함께 붉은색 집락을 형성하며, H2S가 생성된 경우 노란색 테두리 관찰.

적당히 성장이 이루어지며 노란색의 집락 형성.

그람 양성균으로 자라지 않음.

RV broth

성장이 잘 됨.

성장이 잘 안 됨.

성장이 잘 안 됨.

BHI (Brain heart infusion) broth

성장이 잘 됨.

-

증식이 일어나며 혼탁.

Blood agar

중간크기, smooth, 둥근, 백색 집락

중간크기, smooth, 둥근, 회백색 집락

S.aureus:

beta hemolysis

Mannitol salt agar

성장이 잘 안 됨.

성장이 잘 안 됨.

coagulase-는 배지변화 없이 분홍이나 빨간 집락 형성, Coagulase+는 배지에 노란 zone과 노란색 집락형성



출처: 배지 종류- 두산백과사전, 다수 네이버 블로그(....)

정리는 XDii

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Posted by XDii